1.3.2 Le méthode utilisé pour l’examine direct
C’est effectué selon les étapes
suivantes
1-L’échantillonnage
Ce fait par grattage de lésion avec
la lame de bistouri et étale sur la lame porte objet en vue réalise un frotti
(FAMKAN ,2005) L’adrénaline aidera à obtenir un grattage sans effusion de sang.
Avec moins de globules rouges sur la lame, la recherche des parasites sous le
microscope sera plus rapide et plus facile on suit les étapes suivants (O.M.S.
,2014) :
1-Nettoues toute la lésion ses bords
avec l’alcool à 70% au moins 3 minuits
2-retirer la croute. Éliminer le
sang avec un gaze .gratter fermement les bords et le centre de la lésion jusque
il y ait du tissu visible sur la lame
3- déplacé la lame bistouri sur la
surface d’un lame pour déposer une couche mince de matériel racle répétez
l’opération sur déférente partie de la zone au moins jusque-là moite de la
surface de la lame soit recouvert de matériel
4-sécher la lame à température
ambiante (3 min)
5-fixer les lames et les colorer
avec MGG.
2-la coloration
Pour la coloration on utilise le MGG
ou le Giemsa (IZRI et BELLAZZOUG.,2007)
La technique originelle de MGG
consiste à recouvrir le frottis d’une solution de MGG et le laisser agir 3
minutes. Laver ensuite rapidement à l eaux tamponnée. recouvrir d’une solution
de Giemsa diluée a 3 % dans du tampon phosphate a PH 7.2 et laisser agir 15
minutes .laver a l eaux d robinet et sécher (HAI DUONGA et
RICHARD-LENOBLEA,2008)
3- l’observation et l’identification
Cette étape est la dernière pour
déclarer le cas négative ou positive de leishmania .se fait par détermine le
corps de leishmania par l’observation sous un microscope a grossissement X100.
Les parasites appariassent sous leur
forme amastigote, isoles ou en amas dans le cytoplasme des macrophages (IZRI et BELLAZZOUG.,2007)
1.3.2. – Diagnostic de la leishmaniose cutanée
par la culture
Dans cette partie ont développé la
méthode de diagnostic par un milieu de culture
Ont préparé les milieux de cultures
suivants :
- Le milieu à base d’œuf :
- blanc d’œuf.
- jaune d’œuf.
- Le milieu de Novy Mac Neal Nicolle
« N.N.N. ».
- Le milieu sérum de lapin « SLap.
».
2.4. – Test de stérilité
Nous tenons à souligner qu’avant de
stocker les différents milieux de culture nous avons effectué un contrôle de
stérilité en incubant ces milieux x à 37°C pendant 48 heures afin de détecter une
éventuelle contamination microbienne ou fongique.
2.5. – Ensemencement
On utilise à cet effet une seringue
stérile contenant 0,5 ml d’eau physiologique à 0,9 %, et surmontée une aiguille
fine. L’aiguille est piquée au niveau du bourrelet périphérique, on triture par
des mouvements de va et vient, on injecte un faible volume d’eau physiologique
et puis on aspire dans la seringue les sérosités et les fragments tissulaires.
L’opération est
répétée en plusieurs
points de la
lésion et le contenu de
la seringue est ensemencé
sur les différent
milieux de culture
avec les percussions
de stérilité :
le produit pathologique de chaque patient a été
ensemencé sur milieu NNN, SLap., SCh., blanc d’œuf (B.O.) et jaune d’œuf.
Toutes les cultures ont été incubées à 25°C.
A partir du troisième jour
d’incubation, la phase liquide du milieu de culture est contrôlée au microscope
entre lame et lamelle.
En cas de la
positivité, les formes Promastigotes
mobiles sont visibles.
Au cours du 7ème
jour d’incubation si la culture est négative, on repique sur un milieu
neuf. Cette opération est répétée 4 fois à une semaine d’intervalle avant de
conclure à la négativité.
1.3.2.1 les matériels pour la culture
Les réactifs
4 œufs (après on sépare les jeune d’œuf a les
blanc d’œufs)
Solution antibiotique (pénicilline)
Les matériels
Bain marie
Erlenmeyer 250 ml
Pipette jauge
Pipete pasteur stérile
Etuve régale a 37 °c pour relise le
test stérile
Etuve réglée a 25 °c pour
réaliser la culture
Bec benzène utilise au cours de
toute la manipulation et préparation des différentes milieux de culture afin
d’éviter toute contamination inattendu
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